Validación del método para cuantificar Escualeno, Campesterol, Sitosterol y Estigmasterol en una muestra de aceite por cromatografía de gases

Abstract

En el presente trabajo se validó un método para cuantificar escualeno, campesterol, sitosterol y estigmasterol en una muestra de aceite por cromatografía de gases. El análisis cromatográfico se llevó a cabo en un CG Shimadzu (GC2010 Plus) equipado con un sistema de inyección On-Colum-Split/Splitless, un detector FID y un automuestreador. 2,0 uL de muestra fueron inyectados a una temperatura de 325 ºC en el puerto de inyección y 50 °C de temperatura inicial en la columna. La fase móvil o gas de arrastre empleado fue helio, mientras que la columna usada fue DB5 19091J-413 (Agilent technologies 30 m × 0,320 mm), todo el método se maneja solo en Split con presión de 91,0 Kpa, flujo total de 129,4 mL/min, flujo en columna de 6,02 mL/min, velocidad lineal de 90,5 cm/s, flujo de purga 3,0 mL/min y Split ratio 20,0. La corrida cromatográfica se llevó a cabo bajo el siguiente gradiente de temperatura 50,0 ºC, 1 min, 220 ºC, 0,0 min, 230,0 ºC, 0 min, 280,0 ºC, 0 min y 350,0 ºC, 20 min. Los analitos fueron detectados empleando un detector FID a 325 ºC, con una relación de aire/H2 de 40/400 o 1/10. El procedimiento propuesto mostró comportamiento lineal evidenciando la correlación existente entre la concentración y la media del área de los picos resultantes. Se desarrollaron procesos de calibración por dos analistas diferentes obteniéndose valores de regresión adecuados (0,998-1,000). El límite de detección se determinó analíticamente por medio del límite inferior tomando como base la concentración de cada patrón de las muestras, así: para el estigmasterol: 61,43 ug/mL, el sitosterol: 60,11 ug/mL, el escualeno: 109,78 ug/mL y para el campesterol: 59,90 ug/mL. Las muestras calculadas presentaron una concentración muy cercana a la concentración de cada estándar. El método se evaluó por triplicado, preparando la solución en concentraciones de rango medio absorbancia media, siendo preparado por dos analistas (A y B), obteniendo un coeficiente de variación menor al 2 % y una desviación estándar de 0,27 con un resultado satisfactorio. El método propuesto en este trabajo permite validar y cuantificar escualeno, campesterol, sitosterol y estigmasterol en muestras concentradas de aceite de palma empleando la técnica CG-FID.