Contextualización: los cítricos son una de las especies arbóreas más cultivadas en todo el mundo. Poseen una gran importancia económica por su producción es mayor a cualquier otro frutal.    Vacío de conocimiento: pese a la gran demanda de cítricos en Colombia, se conoce muy poco acerca del origen y la diversidad genética. Asimismo, no se han realizado estudios de caracterización molecular de las variedades de cítricos de la colección de la Universidad de los Llanos, los cuales son importantes para implementar estrategias de conservación y uso potencial de los recursos genéticos.    Propósito del estudio: evaluar la diversidad genética de cuatro variedades de cítricos (Naranja Tangelo, Naranja Valencia, Mandarina Arrayana y Limón Castilla), establecidas en la Universidad de los Llanos con siete cebadores ISSR.    Metodología: la caracterización molecular se realizó en los laboratorios de Biotecnología Vegetal y Genética y Reproducción Animal de la Universidad de los Llanos. Se generó una matriz binaria de ausencia y presencia. La similitud genética entre los individuos se calculó utilizando el coeficiente de similitud de Nei y Li (1979). El análisis clúster se realizó por el método UPGMA y se generó un dendrograma utilizando el paquete estadístico NTSYS, versión 2.02 PC. Se estimó la heterocigosidad insesgada, el porcentaje de loci polimórficos y el f estadístico insesgado con un intervalo de confianza del 95%, utilizando el paquete estadístico TFPGA, versión 1.3. Resultados y conclusiones: se obtuvo un total de 80 bandas, de las cuales el 86.25% fueron polimórficas. La heterocigosidad estimada promedio para la población total fue de 0,29, que evidencia una moderada diversidad genética. Los cebadores CGA y AG fueron los de mayor aporte a la ... Contextualization: Citrus trees are one of the most cultivated tree species in the world. They are of great importance since their production is greater than that of any other fruit tree.   Knowledge gap: Despite the great demand for citrus fruits in Colombia, there is limited knowledge about the origin and genetic diversity. Likewise, molecular characterization studies of citrus varieties established in the work collection of the Universidad de los Llanos have not been carried out, which is of vital importance to implement conservation strategies and potential use of genetic resources.   Purpose: to evaluate the genetic diversity of four citrus varieties (Tangelo orange, Valencia orange, Arrayana mandarin and Castilla lemon), established at the University of the Llanos with seven ISSR primers.   Methodology: The molecular characterization was carried out in the Plant Biotechnology and Animal Reproduction and Genetics laboratories of the Universidad de los Llanos Universidad de los Llanos. A binary matrix of absence and presence was generated. The genetic similarity between the individuals was calculated using the coefficient of similarity of Nei and Li (1979). The cluster analysis was performed by the UPGMA method and a dendrogram was generated using the NTSYS statistical package, version 2.02 pc. The unbiased heterozygosity, the percentage of polymorphic loci, and the unbiased f statistic were estimated with a 95% confidence interval, using the TFPGA statistical package, version 1.3. Results and conclusions: A total of 80 bands were obtained, of which 86.25% were polymorphic. The average estimated heterozygosity for the total population was 0.29, which shows a moderate genetic diversity. The CGA and AG primers were the ones with the greatest contribution to the estimation of genetic polymorphism. Little genetic differentiation was found (Fst = 0.03). At a level of similarity of 0.42, seven groups were formed, with groups 1 and 2 being the ones that grouped the largest number of genotypes of the four species, being mostly Arrayana mandarin and Tangelo orange. The seven primers were significant for the estimation of genetic diversity in citrus fruits and constitute a tool with great potential for further improvement work in this species.Atualmente, os marcadores moleculares são uma ferramenta importante no aprimoramento genético, dentre os quais se destaca a utilidade dos Microssatélites Aleatórios Amplificados (RAM) nos estudos genéticos de várias espécies em todo o mundo. Foi avaliada a variabilidade genética de quatro espécies de citros (limão castilla, laranja tangelo, laranja valencia e mandarina arrayana), localizadas na Universidad de los Llanos com sete primers de RAM. Foram obtidas 80 bandas e 86,25% de bandas polimórficas. Os primers CGA e AG foram os que mais contribuíram para a estimativa do polimorfismo genético. Foi encontrado um Fst de 0,029, indicando pouca diferenciação genética. Na semelhança de 0,42, sete grupos foram formados, com os grupos 1 e 2 agrupando o maior número de indivíduos das quatro espécies, concentrando o maior número de genótipos de tangerina arrayana e toda a laranja tangelo. Sendo a distância genética entre as duas muito próxima, possivelmente devido a um ancestral comum, pois compartilham características moleculares e morfológicas, como a cor, tanto da polpa quanto do fruto. Os sete primers são significativos para a estimativa da variabilidade genética em citros como uma ferramenta com grande potencial para futuros trabalhos de melhoramento.