La adaptación de las vitroplantas a condiciones fisiológicas ambientales (endurecimiento) es uno de los puntos más críticos del proceso de obtención de plantas a través del cultivo de tejidos. De tal manera, el cuello de botella de la producción de material es la etapa ex vitro, aun en yuca donde se han reportado cifras que alcanzan el 90% de pérdidas. Por tal motivo, el objetivo fue definir sustratos orgánicos que permitirán la aclimatación y crecimiento de vitroplantas de yuca (Manihot esculenta) variedad brasilera. Por esta razón, se evaluaron tres tipos de sustratos orgánicos: MB 1 (humus sólido + cascarilla de arroz seca 1:1), MB2 (humus sólido + viruta 1:1) y MB (Bocashi) para el endurecimiento de plantas con 8 semanas in vitro. El sustrato MB1 permitió la sobrevivencia y adaptación del 80% de las vitroplantas, en comparación con el MB2 32,5% y el MB sin ninguna. El tiempo de duración de la etapa ex vitro fue hasta 60 días y su relación con el número de nudos (12), hojas (8) y a la altura de las plantas (31 cm) es el más representativo para el MB1. En conclusión, el sustrato MB1 es considerado el idóneo, tanto a nivel nutricional como componente estructural del suelo al tener una porosidad adecuada para el enraizamiento de la planta y permitir una mejor adaptación en fase de campo.