Objetivo. Determinar la seroprevalencia de Leptospira spp y factores de riesgo en estudiantes de medicina veterinaria y zootecnia de la Universidad de Tunja, Colombia. Método. Se utilizó la prueba de microaglutinación (MAT) para 13 serovares de Leptospira en sueros de 51 estudiantes. Los datos epidemiológicos y factores de riesgo, se recogieron a través de una encuesta. Resultados. La seroprevalencia de Leptospira fue 25,5% (IC95% 13,1 - 36,8). La edad promedio de los estudiantes fue 26,2 años; DE = 4,15). La prevalencia fue mayor en hombres que en mujeres (36,6% vs. 20%, p > 0,05) sin diferencia estadística. La reactividad a los serovares de Leptospira fue 5,88% para Australis (serovar bratislava), Grippotyphosa (serovar Grippotyphosa), Sejroe (serovarHardjo Prajitno), Pomona (serovar Pomona) y Tarassovi (serovar Tarassovi); y de 1.96% para Canicola (serovar Canicola), Icterohaemorragiae (serovar Copenhageni) y Shermani (serovar Shermani). Se encontró que trabajar o tener práctica clínica durante los seis meses anteriores a la toma de la muestra representó un riesgo de 2,25 (0,1209 – 2,1342) veces para presentar leptospirosis y el haber tenido accidentes laborales en el desarrollo de las actividades como salidas de campo o en la práctica clínica, representó 2,69 (0,6393 – 11,3892) veces el riesgo de presentar seropositividad. Las variables de riesgo asociadas no fueron significativas (p=0,05). Conclusión. De acuerdo con los resultados se puede observar que la Leptospirosis es una enfermedad de gran importancia y de elevada seropositividad en el departamento de Boyacá, principalmente en la población que se encuentra constantemente en riesgo ocupacional al trabajar con animales.