El establecimiento del cultivo in vitro de segmentos nodales de Guadua angustifolia presenta como principal inconveniente la contaminación por microorganismos, causando pérdidas biológicas y económicas. Esta investigación fue desarrollada en el Centro Nacional para el Estudio del Bambú-Guadua, en Córdoba, Quindío y financiada por la Corporación Autónoma Regional del Quindío (C.R.Q). Se evaluaron seis tratamientos para la desinfección de los explantes de guadua con hipoclorito de sodio (NaClO) en concentraciones del 2% y 3%, cada uno en tiempos de aplicación de 5, 10 y 15 minutos, posteriormente los explantes fueron sembrados en el medio de cultivo Murashige y Skoog, suplementado con 6-BAP a razón de 3mg L-1. También se valoró el porcentaje de brotación. El mejor resultado de desinfección y de brotación se obtuvo con el NaClO al 2% durante 15 minutos.The establishment of the in vitro culture of Guadua angustifolia nodal segments presents as the main problem the contamination by microorganisms, causing biological and economic losses. This research was developed at the National Center for the Study of the bamboo-Guadua bamboo, in municipality of Cordoba, Quindio and it was financed by the Regional Autonomous Corporation of the Quindio (C. R. Q). Six treatments were evaluated for the disinfection of the explants of guadua bamboo with sodium hypochlorite (NaClO) in concentrations of 2% and 3 %, each one of them in time of application of 5, 10, and 15 minutes , the explants were planted in the culture medium Murashige and Skoog medium supplemented with 6-BAP at a rate of 3mg L-1. The percentage of sprouting was also evaluated. The best result of disinfection and budding was obtained with the NaClO to 2% for 15 minutes.